雙光束紫外-可見分光光度計核查操作規程

1 說明

1.1 工作原理

紫外可見分光光度法是利用物質分子對紫外可見光譜區的輻射的吸收來進行分析的一種儀(yi) 器分析方法。這種分子吸收光譜產(chan) 生於(yu) 價(jia) 電子能級的躍遷，它廣泛用於(yu) 無機和有機物質的定性和定量分析。

朗伯一一比耳定律（Lambet -Beer）是光吸收的基本定律，俗稱光吸收定律，是分光光度法定量分析的依據和基礎。當入射光波長一定時，溶液的吸光度是吸光物質的濃度c及吸收介質厚度（吸收光程）的函數。其常用表達式如下（式中ε為(wei) 係數）：

A=ε·c·l

紫外見分光光度計是基於(yu) 紫外可見分光光度法的原理工作的常規分析儀(yi) 器。根據光路設計的不同，紫外可見分光光度計可以分為(wei) 單光束分光光度計、雙光束分光光度計和雙波長分光光度計。

1.2 適用範圍

雙光束紫外-可見分光光度計（以下簡稱儀(yi) 器），係指從(cong) 單色器發出的單色光經光束開關(guan) （斬光器）分成為(wei) 樣品和參比兩(liang) 條光束結構的儀(yi) 器。它能消除光源不穩和放大器增益變化的影響，並能自動記錄和掃描物質的吸收光譜圖。儀(yi) 器在開機後通常會(hui) 做一些自檢，但仍應按本規程進行檢定。儀(yi) 器的波長範圍包括195~800nm，狹縫為(wei) 0.1~5nm可調。

1.3 製定依據

本規程主要參照國家計量檢定規程《JJG 178-2007紫外、可見、近紅外分光光度計》、《JJF 1641-2017紫外可見分光光度計型式評價(jia) 大綱》及《中國藥典》2015年版四部指導通則“0401紫外-可見分光光度法”擬定。

2.項目及技術要求

2.1 波長準確度 ≤±1.0nm（紫外光區），≤±2.0nm（500nm附近）；

    波長重複性 ≤0.5nm。

2.2 基線平直度 ≤0.01 吸光度。

2.3 0%線噪聲  ≤0.1%，100%線噪聲  ≤0.5%.

2.4 吸光度準確度 應符合規定。

2.5 雜散光 <0.8%。

2.6 光譜帶寬 ≤標示帶寬±20%。

2.7 吸收池配對誤差 ≤0.5%。

3 檢測條件

3.1 環境條件

3.1.1 室溫為(wei) 10~30℃，相對濕度應小於(yu) 65%。

3.1.2 工作台不受陽光直射，室內(nei) 應無腐蝕性或其它影響測定的氣體(ti) 幹擾。

3.1.3 周圍應無影響檢定的強電場、磁場和震動。

3.1.4 儀(yi) 器檢定前，須先開機預熱半小時。

3.2 設備

鈥玻璃校正片。

3.3 標準物質和試劑

氧化鈥（分析純）、高氯酸（分析純）、重鉻酸鉀（基準品）、硫酸（分析純）、碘化鈉（分析純）、亞(ya) 硝酸鈉（分析純）。

4 檢測方法

4.1 波長準確度和波長重複性的檢測

4.1.1 用氧化鈥溶液的241.13、278.10、287.18、333.44、345.47、361.31、416.28、451.30、485.29、536.64和640.52nm的吸收值進行檢定。檢定時先配製4%氧化鈥的10%高氯酸溶液，將儀(yi) 器波長設置為(wei) 700~200nm範圍，狹縫小於(yu) 1nm，以空氣為(wei) 空白，調節透光率為(wei) 100%。取上述氧化鈥溶液，置1cm石英吸收池中，放入樣品光路，以適當的掃描速度繪製氧化鈥溶液的吸收圖譜並打印出峰值，與(yu) 規定值相比較。重複測定三次，取平均值，計算波長準確度與(yu) 重複性。

4.1.2 用鈥玻璃校正片代替氧化鈥溶液，測定方法同上，其尖銳吸收峰主要有279.4、287.5、333.7、360.9、418.5、460.0、484.5、536.2和637.5nm，校正片使用前必須經過校正。

4.2 基線平直度的檢測

4.2.1 按儀(yi) 器要求進行基線校正後，調節狹縫2nm，掃描速度中速，取樣間隔1nm，樣品和參比光路均為(wei) 空氣。在儀(yi) 器波長下限處加10nm，波長上限處減50nm範圍內(nei) 進行掃描，測量圖譜中起始點的吸光度與(yu) 圖譜中偏離起始點多的吸光度（即大偏離點）之差即為(wei) 基線平直度。

4.2.2 允許繪製的基線在更換光源或濾光片時微有跳動，必要時可在檢定前再進行一次基線校正。

4.3 0%線噪聲和100%線噪聲的測定

4.3.1 儀(yi) 器設置為(wei) 時間掃描方式，波長設置為(wei) 250nm，狹縫1nm，樣品和參比光路均為(wei) 空氣，調整透光率為(wei) 100%，用適當的掃描速度做時間掃描2分鍾，觀察100%線的變化，然後再將擋光塊插入樣品光路，觀察0%線的變化2分鍾，讀出各自峰的大（穀）值的差，與(yu) 規定值比較。

4.3.2 儀(yi) 器設置時間掃描方式，波長置500nm，按上述方法測定500nm波長處的100%和0%線噪聲。

4.3.3 如儀(yi) 器無時間掃描方式，也可將儀(yi) 器波長調至規定處，用目視觀察2分鍾，讀出各自峰的大（穀）值的差。

4.4 吸光度準確度的檢測  將儀(yi) 器波長設置於(yu) 400~200nm，狹縫1nm，先用配對的吸收池均裝入0.005mol/L硫酸空白溶液，用合適的掃描速度記錄基線或自動校正基線，然後再將樣品光路改變放0.006%重鉻酸鉀硫酸溶液0.005mol/L硫酸空白溶液，掃描並打印峰穀值，計算吸收係數，重複測定三次，取其平均值與(yu) 規定的吸收係數許可範圍進行比較，應符合表中的規定。

4.5 雜散光的檢查

測定前應將擋光塊插入樣品池，校正儀(yi) 器零點，其透光率應為(wei) 0.0%。按下表列的試劑和濃度，配置成水溶液，置1cm石英吸收池中，在規定的波長處測定透光率，應符合表中規定。

4.6 光譜帶寬的測定

4.6.1 將儀(yi) 器置於(yu) 單光束能量測定方式，波長範圍置於(yu) 660~650nm，選擇小狹縫，用合適的掃描速度進行波長掃描，繪製氘燈譜線，並使氘燈峰值為(wei) 滿量程的三分之一，測量氘峰的半峰寬即為(wei) 小光譜帶寬，與(yu) 規定值比較。

4.6.2 沒有氘燈的儀(yi) 器選擇汞燈546.1nm（或253.7nm）的特征譜線同4.6.1方法掃描並計算。

4.7 吸收池配對誤差的檢測

4.7.1 取洗淨的石英吸收池盛滿水，在220nm處，以其中一隻透光率為(wei) 100%，再分別更換其它吸收池，測其透光率，凡誤差在規定範圍內(nei) 的，再分別裝入0.006%重鉻酸鉀的0.005mol/L硫酸溶液，在350nm處，以其中一隻透光率為(wei) 100%，分別測定其它吸收池，凡透光率誤差在規定範圍內(nei) 的即為(wei) 配對的吸收池。

4.7.2 取洗淨的玻璃吸收池盛滿水，在660nm處，以其中一隻透光率為(wei) 100%，再分別更換其它吸收池，測其透光率，凡誤差在規定範圍內(nei) 的，再分別裝入0.006%重鉻酸鉀的0.005mol/L硫酸溶液，在400nm處，以其中一隻透光率為(wei) 100%，分別測定其它吸收池，凡透光率誤差在規定範圍內(nei) 的即為(wei) 配對的吸收池。

4.7.3 由於(yu) 吸收池在不同波長吸光度有少許改變，在使用時，好先測定配對誤差，必要時應扣除。

5 檢測結果處理

自檢結果全部符合技術要求者，即為(wei) 合格，可以使用。若檢測結果不符合規定，應重新調試儀(yi) 器再進行自檢，符合規定後方可使用。

6 檢驗周期

應至少每年檢測一次，重要部件的維修和更換、變動放置地點、或對儀(yi) 器性能有懷疑的，應按本規程隨時進行自檢。

參考文獻

1.《T9、T10雙光束紫外-可見分光光度計使用說明書(shu) 》-1946韦德官网

2.《JJG 178-2007紫外、可見、近紅外分光光度計》

3.《JJF 1641-2017紫外可見分光光度計型式評價(jia) 大綱》

4.《中國藥典》2015年版四部指導通則“0401紫外-可見分光光度法”

5.《藥品檢驗儀(yi) 器自檢/核查規範》-中國食品藥品檢定研究院